國標(biāo)GB14922－2022 中大鼠小鼠病毒檢測項(xiàng)目

國標(biāo)GB14922－2022中大小鼠的病毒必須檢測項(xiàng)目如下：

Ⅲ型呼腸孤病毒Reo-3、仙臺病毒SV、小鼠肝炎病毒MHV、漢坦病毒HANT、小鼠肺炎病毒PVM、小鼠細(xì)小病毒MVM、大鼠細(xì)小病毒KRV、大鼠細(xì)小病毒H-1。

國標(biāo)GB14922－2022中大小鼠的病毒必要時檢測項(xiàng)目如下：

淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒LCMV、大鼠冠狀病毒RCV、鼠痘病毒Ect、小鼠腦脊髓炎病毒TMEV、多瘤病毒POLY。

小鼠諾如病毒MNV是免疫缺陷小鼠的必須檢測項(xiàng)目。

以上病毒大多數(shù)病毒是RNA病毒，但是小鼠細(xì)小病毒MVM、大鼠細(xì)小病毒、鼠痘病毒Ect、多瘤病毒POLY是DNA病毒。

常用病毒檢測方法

常規(guī)樣本的病毒檢測方法，多采取血清學(xué)方法，GB14922中對各種病毒的檢測有詳細(xì)的描述，包括病毒抗原制備、抗體標(biāo)記，以及檢測流程及結(jié)果讀取。血清學(xué)檢測方法包括：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA，免疫酶試驗(yàn)IEA，免疫熒光試驗(yàn)IFA等抗體檢測方案。抗體檢測的缺點(diǎn)是無法區(qū)分當(dāng)前感染還是既往感染，也不能用作診斷免疫缺陷小鼠（無法產(chǎn)生抗體）和病毒早期感染（抗體還未產(chǎn)生），容易導(dǎo)致漏檢。但是可以了解既往感染史。

除此之外，隨著分子生物學(xué)檢測方法的進(jìn)步，熒光定量PCR成為用于檢測病毒感染的常用的方法。其中RNA病毒需要進(jìn)行額外的逆轉(zhuǎn)錄過程轉(zhuǎn)為DNA，再進(jìn)行后續(xù)的檢測。熒光定量PCR檢測是通過檢測熒光信號的強(qiáng)弱來判斷是否存在病毒或病毒含量的高低。不同的熒光標(biāo)記物也使得多重檢測成為可能，比如一個反應(yīng)體系內(nèi)可見檢測多重?zé)晒釬AM、HEX、ROX 熒光，每種熒光探針標(biāo)記1-3種病毒，從而可以實(shí)現(xiàn)一個孔中多種病毒的檢測。

熒光定量PCR檢測病毒時所需的樣本量少、更是可以在疾病早期檢測到病毒感染，特異性高，也得到了廣泛的應(yīng)用和重視。核酸PCR檢測需要防污染措施。首先針對特定核酸區(qū)段，設(shè)計(jì)特異性的病原體檢測引物，確保都能精準(zhǔn)識別目標(biāo)病原體，有效避免非特異性擴(kuò)增帶來的假陽性。具體的樣本檢測過程需要設(shè)置陽性對照，可通過觀察陽性對照的擴(kuò)增曲線，判斷qPCR過程是否正常。翼和生物開發(fā)的大小鼠病原體qPCR檢測試劑盒可同時檢測多種病毒。分兩種試劑盒，一種qPCR試劑盒是聯(lián)檢試劑盒，能判斷樣本是否感染國標(biāo)規(guī)定的幾種病毒，并且出現(xiàn)陽性的話可鎖定在2-3種病毒的范圍，但是確定具體哪種病毒感染則需要搭配鑒定試劑盒進(jìn)行具體病毒的鑒定。但是一般SPF來源的鼠樣本都是比較干凈，檢測常為陰性，所以無需進(jìn)行特定病毒的鑒定。聯(lián)檢試劑盒：國標(biāo)病毒必檢八項(xiàng)、國標(biāo)病毒選檢六項(xiàng)。聯(lián)檢試劑盒中一個熒光通道可以同時檢測2-3種病毒體，但是不區(qū)分這2-3種病毒，也就是說一旦這個熒光通道有信號陽性，那么這2-3種病原體都有可能是陽性。5款鑒定試劑盒。鑒定試劑盒中一個熒光通道只鑒定一種病毒，所以可以通過熒光通道直接判斷感染的具體病毒。

熒光定量PCR檢測靈敏度高、特異性強(qiáng)，一般高于10 copies/μl的核酸病毒樣本可被檢測到。

一旦實(shí)驗(yàn)動物自身攜帶一些病毒，不僅可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)失真，還可能造成大量科研資源的浪費(fèi)，構(gòu)建一套高效、精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量檢測和管理體系，是保障動物實(shí)驗(yàn)正常進(jìn)行的重要環(huán)節(jié)。