1. CHO細胞

中國倉鼠卵巢細胞（CHO，Chinese hamster ovary cells），是1957 年研究者Theodore T. Puck 從中國倉鼠卵巢組織中分離出原始的 CHO 細胞系，是一種實驗室常見的貼壁細胞系。隨后，衍生出多種具有不同屬性的細胞系，常見的有 CHO-K1、CHO-DG44 和 CHO-DXB11 等。CHO-K1，即野生型 CHO 細胞；CHO-DXB11，敲除 CHO-K1 單 DHFR(二氫葉酸還原酶) 等位基因；CHO-DG44，兩個 DHFR 等位基因都被敲除。

2. CHO細胞應用

CHO 細胞通常呈上皮細胞樣或成纖維細胞樣，具有貼壁生長的特性，但經(jīng)過適應后也可進行懸浮培養(yǎng)。CHO 細胞缺乏脯氨酸合成基因，培養(yǎng)基中需添加 L - 脯氨酸以支持其生長。

CHO細胞的優(yōu)點：

1、CHO細胞遺傳背景清晰；

2、CHO細胞可以適應無血清懸浮培養(yǎng)；

3、CHO細胞表達的重組蛋白質能夠獲得類似于人源蛋白質的翻譯后修飾；

4、已經(jīng)開發(fā)出了多種商業(yè)化高效高表達系統(tǒng)。

CHO細胞的應用：

大多數(shù)批準的單抗藥來源于 CHO 細胞，可應用于各種適應癥。

另外CHO細胞系不會合成脯氨酸及表達表皮生長因子受體（EGFR），所以CHO細胞成為研究各種EGFR突變的理想選擇。

3. CHO細胞殘留DNA

CHO細胞殘留DNA是指利用CHO細胞進行生物制藥（如生產(chǎn)單克隆抗體、重組蛋白藥物等）過程中，最終藥物產(chǎn)品中殘留的來源于CHO細胞的基因組DNA片段。

作為生物制藥產(chǎn)品中的關鍵雜質，CHO細胞殘留DNA其存在可能帶來潛在安全風險，因此是藥物質量控制的重要指標之一，需嚴格遵循藥典標準進行檢測與控制。殘留DNA的產(chǎn)生原因是多樣的。細胞破裂釋放、純化工藝殘留等。

DNA片段化殘留可能引起癌變，免疫反應等，所以藥物生產(chǎn)過程中需要嚴格控制其含量。

4. CHO細胞殘留DNA的檢測方法

DNA片段化殘留有多種檢測方法，各國的藥典都有比較明確的規(guī)定。中國藥典中規(guī)定的檢測方法有DNA探針雜交法、熒光染色法、定量PCR法。

雜交發(fā)：將特異性單鏈DNA探針標記后，與吸附在固相膜上的供試品單鏈DNA雜交，讀取雜交結果，與已知含量的陽性DNA對照比對后，可測定外源性DNA殘留量。

熒光染色法：雙鏈DNA熒光染料DNA特異結合形成復合物，在一定的DNA濃度范圍內熒光強度與DNA濃度成正比，可計算DNA殘留量。

定量PCR法：PCR反應過程中可通過熒光標記的探針或熒光染料摻入雙鏈，通過檢測熒光數(shù)值的變化，從而檢測PCR產(chǎn)物量。熒光強度達到一定閾值的Ct值與該體系所含的起始DNA模板量的對數(shù)值呈線性關系。根據(jù)已知濃度的DNA標準曲線，可測定外源DNA殘留量。翼和開發(fā)了CHO細胞殘留DNA的檢測試劑盒。Biowing® CHO 殘留 DNA 檢測試劑盒用于定量檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中 CHO 宿主細胞 DNA。采用一套引物探針在FAM通道定量檢測樣品中 CHO 殘留 DNA，另外一套引物探針在HEX通道檢測內參DNA。該試劑盒具有以下特點：靈敏：檢測限可低至1 fg/μL。簡單：標曲定量參考品預分裝并凍干，繪制標曲簡單?？煽浚涸噭┖信涮子蠧HO DNA 定量參考品，已溯源至國家標準品；抽提加入內參核酸，全過程質量控制。準確：樣品加標回收，評估 DNA 提取的效率、回收率和準確度，評估驗證分析方法和系統(tǒng)性能，進一步保證結果的準確性?？旖荩翰僮鲿r間短，3 h 內出結果。