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小鼠端粒長度檢測試劑盒的標準化操作流程分享

發(fā)布時間： 2025-11-14　　點擊次數(shù)： 382次

　　端粒是染色體末端的保護性DNA-蛋白復合結(jié)構(gòu)，其長度隨細胞分裂逐漸縮短，被視為細胞衰老與壽命的重要生物標志物。在衰老機制、抗衰老藥物篩選及疾病模型研究中，準確測定小鼠端粒長度至關(guān)重要。使用小鼠端粒長度檢測試劑盒雖操作便捷，但若步驟疏漏，易導致數(shù)據(jù)偏差、重復性差甚至假陽性結(jié)果。掌握小鼠端粒長度檢測試劑盒的標準化操作流程，是獲取可靠科研數(shù)據(jù)的前提。

　　一、實驗前準備：樣本與試劑管理
　　樣本采集規(guī)范：取小鼠新鮮血液、脾臟或尾尖組織，迅速凍存于-80℃，避免反復凍融；
　　DNA提取質(zhì)量控制：使用高純度基因組DNA提取試劑盒，確保A260/A280比值在1.8-2.0之間，濃度≥20ng/μL；
　　試劑平衡與配制：將試劑盒內(nèi)所有組分室溫平衡30分鐘，按說明書精確配制qPCR反應液，避光操作防止熒光染料降解。
　　二、qPCR體系構(gòu)建關(guān)鍵要點
　　引物特異性驗證：確認試劑盒所含端粒（Tel）與單拷貝參考基因（如36B4、Gapdh）引物適用于小鼠基因組；
　　模板用量一致：每孔加入等量DNA（通常5-20ng），避免因濃度差異影響Ct值；
　　設(shè)置完整對照：
　　陽性對照（已知端粒長度樣本）；
　　陰性對照（無模板NTC）；
　　技術(shù)重復（每樣本至少3個復孔）；
　　避光加樣：使用低吸附槍頭，輕柔混勻，離心去除氣泡。
　　三、qPCR程序運行與數(shù)據(jù)分析
　　嚴格遵循推薦程序：通常為95℃預變性10min，隨后40個循環(huán)（95℃15s+60℃1min）；
　　熔解曲線分析：確認端粒與參考基因擴增產(chǎn)物為單一峰，排除引物二聚體干擾；

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